infección por hongos en los pies

infección por hongos en los pies

Abstracto

Resumen: Las infecciones por hongos son cada vez más frecuentes debido a la expansión de las poblaciones en riesgo y el uso de modalidades de tratamiento que permiten una mayor supervivencia de estos pacientes. Debido a que el examen histopatológico de los tejidos detecta invasión fúngica de los tejidos y los vasos, así como la reacción del huésped al hongo, que es y seguirá siendo una herramienta importante para definir el significado de diagnóstico de cultivo positivo aísla o los resultados de las pruebas de PCR. Sin embargo, hay muy pocos casos en que las características morfológicas de los hongos son específicos. Por lo tanto, el diagnóstico histopatológico debe ser principalmente descriptiva del hongo y debe incluir la presencia o ausencia de la invasión de tejido y la reacción del huésped a la infección. El informe de patología también debe incluir un comentario indicando los hongos más frecuentes asociados a que la morfología, así como otros hongos y parásitos posibles que debe ser considerado en el diagnóstico diferencial. técnicas alternativas se han utilizado para determinar el agente específico presente en la muestra de histopatológicos, incluyendo inmunohistoquímica, en el lugar hibridación y PCR. Además, técnicas como la microdisección láser serán útiles para detectar las infecciones por hongos de doble ahora reconocidos con más frecuencia y el entorno local en el que se produce este fenómeno.

INTRODUCCIÓN

La presentación clínica de la reacción del huésped y de las micosis más comunes

Cuando las enfermedades levaduras o estructuras de levadura Al igual que generalmente se observan en los tejidos

Blastomicosis.

(I) epidemiológica y situaciones clínicas cuando blastomicosis se deben considerar en el diagnóstico diferencial.

La inhalación de la B. dermatitidis conidios es la vía habitual de la infección, y una variedad de respuestas puede ocurrir en el pulmón, incluyendo las infecciones asintomáticas, neumonía aguda y crónica y el síndrome de dificultad respiratoria aguda fatal (SDRA) (99. 118). En general, la neumonía aguda es rara vez identificado brotes fuera. Con mayor frecuencia, la blastomicosis pulmonar se diagnostica en los casos de neumonía crónica o cuando se sospecha de una neoplasia pulmonar. En 20 a 40% de los casos de la enfermedad se ha convertido en sistémica en el momento del diagnóstico y no es la piel, tejidos blandos, hueso, genitourinario (GU), o del sistema nervioso central (9. 87. 99. 118). En casos raros se han descrito lesiones en la piel sin la participación de pulmón, lo que sugiere la inoculación cutánea directa. Las lesiones de la piel que se describen con mayor frecuencia son las úlceras indoloras o lesiones verrugosas. Blastomicosis en pacientes inmunocomprometidos parece ser más graves y más frecuentemente fatal (99). Cabe señalar que en los pacientes con afectación del sistema nervioso central, diabetes mellitus es un factor predisponente importante (9).

(Ii) Características morfológicas que establecen la blastomicosis aparte.
(Iii) Riesgos en el diagnóstico morfológico.

Pocos estudios han comparado sistemáticamente la presencia de levaduras de base amplia en ciernes en histopatológico o muestras citológicas con la cultura u otros métodos de diagnóstico que confirme el diagnóstico de blastomicosis. Un estudio retrospectivo de 53 pacientes mostró que Coccidioides immitis. Candida albicans. o Aspergilo se recuperó a partir de 4 muestras patológicas (10%) que demuestran las levaduras en ciernes de amplia base en el examen histopatológico directa (118). Un estudio anterior de pacientes con blastomicosis comentó que un alto porcentaje de sus cultivos fueron cubiertos de Candida (87). Esto sugiere que no todo basado en ciernes levaduras en el rango de tamaño de 8 a 15 m se amplia blastomices. Desde histopatológicos o citológicas resultados por lo general pueden ser prestados antes de la cultura está disponible, hay una presión para utilizar estos resultados para guiar el tratamiento, sobre todo porque B. dermatitidis puede tardar hasta 3 semanas para crecer o no crecer en absoluto de estos especímenes. La sensibilidad del cultivo varía dependiendo de la muestra que se obtuvo y puede variar de 62% a 100% (87. 96). El rendimiento diagnóstico de histopatología dependerá de la experiencia existente en el centro donde se ve el paciente (99). Debido a la posibilidad de resultados falsos positivos histopatológicos, patólogos deben describir la levadura en ciernes y el patrón que se observa en la muestra de tejido y deben enumerar las levaduras que pueden tener esta morfología en el campo de informe comentario (Fig. 1). Además, las pruebas alternativas son necesarias para determinar si el paciente realmente tiene la blastomicosis, especialmente en los casos de las zonas donde la enfermedad no es endémica o cuando el cuadro clínico no es típico.

(Iv) la prueba alternativa.

Criptococosis.

(I) epidemiológica y situaciones clínicas cuando criptococosis deben considerarse en el diagnóstico diferencial.

Independiente de la especie, los seres humanos inhalan o levaduras criptocócicas basidiosporas, y por lo tanto el pulmón es el sitio de infección primaria (53. 72. 90). Pocas personas expuestas permanecen asintomáticos, mientras que la neumonía pantalla mayoría, cryptococcomas, o los derrames pleurales. Desde el pulmón, cryptococci pueden difundir al sistema nervioso central (meningitis o producir cryptococcomas), piel, huesos u otros tejidos. C. gattii está asociada con una mayor incidencia de lesiones sólidas en los pulmones y el cerebro de C. neoformans. La frecuencia de la enfermedad diseminada depende del estado inmunológico del paciente: en individuos inmunocompetentes la presentación más frecuente es la pulmonar, mientras que los pacientes inmunodeprimidos comúnmente se presentan con afectación del sistema nervioso central.

(Ii) Características morfológicas que establecen criptococosis aparte.

Criptococos están encapsulados, esférica a la levadura óvalo que medir de 5 a 10 m de diámetro y tienen en ciernes base estrecha (Fig. 1) (31. 56). Una cápsula de polisacárido de espesor da a estos organismos la apariencia característica de tener un espacio libre alrededor de ellos que se puede ver en las secciones de tejido con HE manchas. Al probar CSF, India tinta se puede utilizar como una tinción negativa para resaltar la cápsula. Debido a la cápsula, los brotes aparecen separados de las células madre. Las manchas de la cápsula de polisacáridos con azul Alcian y Mayer o la mancha de mucicarmín de Southgate. Al igual que con todas las otras levaduras, la pared del organismo tiñe con GMS y manchas de PAS. Además, la mancha cryptococci con Fontana-Masson mancha, ya que contienen melanina.

(Iii) Riesgos en el diagnóstico morfológico.

En algunos pacientes con criptococosis, la levadura puede producir menor cantidad de la cápsula de polisacárido característico; por lo tanto, estos organismos pueden parecerse a otras levaduras de tamaño similar, como Candida spp. o Histoplasma. La tinción de estas muestras con Fontana-Masson mancha puede probar que la levadura produce melanina, que es característica de criptococos. El uso de pruebas de antígeno criptocócica con suero y LCR puede no ser útil para los pacientes con mal cryptococci encapsulado, porque la mayoría de las pruebas serológicas detectan antígenos presentes en la cápsula (56).

(Iv) la prueba alternativa.

Histoplasmosis.

(I) epidemiológica y situaciones clínicas cuando la histoplasmosis deben considerarse en el diagnóstico diferencial.

Los pacientes con altas cargas de exposición o los que están inmunosuprimidos pueden presentar una neumonía aguda o SDRA (32. 78). Como macrófagos viajan a los ganglios linfáticos del mediastino, los pacientes pueden presentar mediastinitis, y como macrófagos difunden a través del cuerpo, los organismos extendido a otros órganos, formando nódulos. sitios habituales de difusión incluyen la piel, gastrointestinal (GI), el hígado, el bazo y la médula ósea. Aunque es raro, puede ocurrir infección del sistema nervioso central. histoplasmosis cavitaria crónica que puede ser clínicamente indistinguible de la tuberculosis es una presentación frecuente de los pacientes de edad avanzada con enfisema o individuos inmunocompetentes expuestos a cargas por hongos inferiores.

(Ii) Características morfológicas que establecen la histoplasmosis aparte.

Algunas muestras de tejido pulmonar de pacientes con histoplasmosis pulmonar aguda se han estudiado, y éstos han mostrado áreas nodulares de parénquima y necrosis vascular asociada con la vasculitis linfo-histiocítico (105). El cuadro histopatológico se asemeja al de la granulomatosis linfomatoide, pero dispersos pequeños granulomas con pequeñas levaduras en el parénquima debe sugerir el diagnóstico de la histoplasmosis. Las infecciones pulmonares crónicas que aparecen radiográficamente como lesiones de monedas muestran inflamación granulomatosa típica con necrosis central y material calcificado (32). Las levaduras se encuentran generalmente en este material calcificado necrótico, que puede perderse durante el procesamiento y corte del tejido. En pacientes inmunodeprimidos, hojas de macrófagos cargados de levaduras caracterizan la enfermedad diseminada. Las colecciones de macrófagos distorsionan la arquitectura del órgano y producen áreas necróticas. Debido a que la morfología de H. capsulatum no es específica, es importante realizar la correlación clínico-epidemiológica.

(Iii) Riesgos en el diagnóstico morfológico.

Varios hongos pueden confundirse con H. capsulatum var. capsulatum cuando estudian las secciones de tejido (22. 60): la pequeña variante de B. dermatitidis (En estos casos, la presencia de brotación de base amplia y la búsqueda de formas más grandes puede ser útil para hacer el diagnóstico de blastomicosis), cryptococci cápsula deficientes (en éstos la variación del tamaño de los casos y en busca de levaduras débilmente positivos mucicarmín-tinción puede sugerir el diagnóstico de criptococosis), endosporas de Coccidioides spp. (En busca de restos de una ruptura o un glóbulo spherule intacta es de suma importancia para el diagnóstico de coccidioidomicosis), Pneumocystis jirovecii (Este organismo carece incipiente y tiene un enfoque intraquística), Penicillium marneffei (Este organismo muestra la formación de un tabique transversal en lugar de en ciernes), y Candida glabrata (Este organismo puede mostrar más variabilidad tamaño que en histoplasmosis, y la inflamación es principalmente neutrófilos).

En resumen, el diagnóstico definitivo de la histoplasmosis puede ser difícil con secciones de tejido, y si una parte de la muestra de tejido no fue enviado para cultivos, ensayos alternativos deben ser considerados.

(Iv) la prueba alternativa.

Los cultivos para Histoplasma usando muestras de sangre puede ayudar en el diagnóstico de la enfermedad diseminada. Sin embargo, ya que estos son principalmente organismos intracelulares, los métodos de lisis por centrifugación deberían utilizarse para liberar las levaduras de histiocitos. Además, el organismo crece lentamente, por lo que requieren las culturas de la incubación durante 4 a 6 semanas antes de que se llaman negativo (77). Aunque las pruebas para los anticuerpos puede realizarse utilizando fijación del complemento o de inmunodifusión, la producción de anticuerpos no puede ocurrir en pacientes inmunodeficientes (22. 78). Falsos positivos serología puede ocurrir en pacientes con linfoma, tuberculosis y otras infecciones por hongos, especialmente la blastomicosis. La detección de antígeno en la orina y el suero se puede realizar utilizando EIA con diversos resultados. El antígeno se concentró en la orina, lo que hace Histoplasma la detección de antígeno en este espécimen más fiable. Al igual que en la prueba de anticuerpos, hay resultados falsos positivos con la prueba de antígenos. La reactividad cruzada con la blastomicosis es particularmente problemático porque la histoplasmosis y la blastomicosis tienen endemicidad superposición e histopatológicamente estas levaduras a veces pueden confundirse. Sin embargo, en pacientes con histoplasmosis diseminada la carga de antígeno es menor, y por lo tanto la sensibilidad es menor. La combinación de los resultados de la detección de antígeno en orina y suero puede aumentar la sensibilidad en pacientes con histoplasmosis pulmonar (157). El diagnóstico de la exposición a Histoplasma se ha realizado utilizando la reacción intradérmica a la histoplasmina, pero este reactivo no está disponible en los Estados Unidos (55).

La coccidioidomicosis.

(I) epidemiológica y situaciones clínicas cuando coccidioidomicosis se deben considerar en el diagnóstico diferencial.

Los seres humanos inhalan el artroconidias, que en el pulmón se transforman en estructuras esféricas multinucleadas que contienen cientos de endosporas (117). Se estima que hasta un 60% de los individuos expuestos no tienen síntomas, mientras que el resto puede presentar con lo que parece ser aguda neumonía adquirida en la comunidad (1. 5). En aquellos pacientes con neumonía aguda, los rayos X del pecho muestran infiltrados lobares y adenopatía. Varias erupciones eritematosas (multiforme, nudoso, o tóxicos) son un reflejo de la respuesta inmune a la infección aguda. La mayoría de las infecciones pulmonares agudas conocida como fiebre del valle determinación; Sin embargo, en una minoría de pacientes la infección puede llegar a ser crónica progresiva, que muestre una cavidad o nódulo. enfermedad extrapulmonar puede ocurrir en los miembros de ciertos grupos de riesgo, como los afroamericanos, asiáticos, mujeres embarazadas, pacientes con diabetes o pacientes que reciben corticosteroides para una variedad de condiciones. Los sitios más comunes de difusión incluyen la piel, los ganglios linfáticos, los huesos y las articulaciones; Sin embargo, la complicación más temida es la extensión en el sistema nervioso central. Además de la adquisición de la infección a través de la vía respiratoria, hay informes aislados de la inoculación directa de la piel, dando lugar a lesiones cutáneas primarias o adquisición a través de los órganos trasplantados (21. 102. 116).

(Ii) Características morfológicas que establecen coccidioidomicosis aparte.

Esférulas de diferentes tamaños (de 10 a 100 m) con múltiples endosporas (de 2 a 5 m) son característicos de la coccidioidomicosis y se pueden ver con la rutina de tinción HE (116. 142). Las paredes de algunas de las esférulas pueden aparecer por una brecha, y las endosporas derrame en los tejidos circundantes. Las lesiones activas contienen múltiples organismos, mientras que resolver o lesiones residuales suelen mostrar menor número de organismos. GMS destaca paredes esférulas y las endosporas (Fig. 1). Por el contrario, las reacciones con tinción de PAS varían con la edad de las estructuras: endosporas jóvenes y las esférulas se tiñen fuertemente, mientras que la tinción se desvanece como los organismos maduros. Ocasionalmente, los micelios se pueden observar en los pulmones o la piel lesiones cavitarias (142). La sensibilidad para la detección histopatológico de Coccidioides es decir el 84%, y que para la citología es del 75% (1).

La reacción inflamatoria a endosporas es predominantemente neutrofílica, mientras que la reacción de esférulas es granulomatosa. Por lo tanto, al principio de la infección las lesiones tienden a mostrar piogranulomas debido a que la concentración de esférulas y las endosporas es alta. grupos linfocítica de células B y T alrededor bien formados granulomas con necrosis se han descrito y parecen ser una respuesta importante a la enfermedad (88). Los eosinófilos pueden ser abundantes, la liberación de la proteína básica mayor eosinofílica, y puede crear el fenómeno Splendore-Heppli (un intenso borde de material eosinófilo alrededor de los elementos fúngicos) (127).

(Iii) Riesgos en el diagnóstico morfológico.

Rhinosporidium seeberi. un parásito que causa mesomycetozoan paladar y nasofaríngeas pólipos, produce gran esporangios (algunos se pueden ver a simple vista) con múltiples endosporas internos. R. seeberi tiene morfología muy similar, pero sus esporangios y son más grandes que las endosporas Coccidioides esférulas, y sus interiores que las paredes de esporangiales con mucicarmín. Cuando se sospecha la coccidioidomicosis, es importante buscar las esférulas; endosporas esférulas externos o esférulas jóvenes sin endosporas pueden confundirse con blastomices. Histoplasma. Emmonsia. Candida. Pneumocystis. y otras levaduras (142). También hay que recordar que en los pacientes inmunodeprimidos, más de una infección puede coexistir; por lo tanto, en las zonas de endemicidad, Pneumocystis y Coccidioides se puede encontrar en la misma muestra.

(Iv) la prueba alternativa.

La detección de anticuerpos para Coccidioides puede ser una herramienta de diagnóstico importante. Hoy en día, IgM y IgG se mide generalmente mediante EIA y / o de inmunodifusión; sin embargo, algunos laboratorios siguen utilizando precipitina tubo para medir la IgM y la fijación del complemento para medir los anticuerpos de IgG (142). serología falso negativo se ha visto hasta en el 38% de los pacientes con infección hematógena y el 46% de los casos mortales (1). La detección de antígenos en la orina usando EIA se ha demostrado en el 71% de los pacientes con coccidioidomicosis pero muestra reacción cruzada en 10% de los pacientes con otras micosis endémicas (49).

Micosis.

(I) epidemiológica y situaciones clínicas cuando la candidiasis deben considerarse en el diagnóstico diferencial.
(Ii) Características morfológicas que establecen la candidiasis aparte.

en los tejidos Candida organismos aparecen como esteras de levaduras de medición 3 a 5 m de diámetro mezclado con seudohifas (también referido como filamentos) (Fig. 2) (94). Los filamentos pueden mostrar constricciones periódicas. Los organismos pueden ser vistos con SE, GMS, y las manchas de PAS. El predominante Candida especies que no produce filamentos es C. glabrata. El examen histopatológico de las muestras es muy importante definir invasión de tejidos y vasos, ya que el crecimiento de la piel, los pulmones y el tracto gastrointestinal o genitourinario es sólo indicativa de la colonización (40).

La morfología, la descripción, el diagnóstico y el comentario para las infecciones por hongos que se presentan con hifas o seudohifas en los tejidos. Todas las fotografías son de plata metenamina Grocott (GMS) muestras teñidas con excepción de la inserción en la cuarta fila, que es un Fontana-Masson .

(Iii) Riesgos en el diagnóstico morfológico.
(Iv) la prueba alternativa.

Los cultivos de sangre son indispensables para el diagnóstico de la enfermedad invasiva, aunque se estiman hemocultivos positivos a ocurrir en 50 a 70% de los casos. El fluorescente de ácido nucleico peptídico en el lugar ensayo de hibridación se puede utilizar para identificar las especies más comunes de Candida en las extensiones hechas de botellas de hemocultivos positivos. Multiplex-tandem detección PCR de Candida spp. en sangre entera, suero o plasma ha dado mejores resultados y más rápido que los cultivos de sangre; Sin embargo, este método es todavía para uso exclusivo en investigación y tendrá que ser validado si se utiliza para fines de diagnóstico (85). La detección de – d glucano en suero se ha utilizado, pero la sensibilidad y especificidad variará con el tipo de paciente y el valor de corte utilizado para la prueba (167). La sensibilidad es baja (57%) cuando se utilizan muestras individuales de pacientes con candidemia en la unidad de cuidados intensivos o vigilancia de una vez por semana con los pacientes de trasplante de hígado, mientras que es más alto (97%) cuando se usa un valor de corte baja (60 pg / ml). Especificidad oscila desde 44 hasta 92% con muestras individuales de pacientes con candidemia utilizando valores de corte alta (80 pg / ml).

Enfermedades causadas por otros hongos y organismos semejantes a hongos que muestran levaduras u organismos de la levadura-como en el tejido.

(I) epidemiológica y situaciones clínicas cuando las levaduras u organismos semejantes a las levaduras se deben considerar en el diagnóstico diferencial.

Pneumocystis neumonía fue una infección poco común hasta 1982, cuando apareció el SIDA en el mundo occidental (28). Hasta el descubrimiento y el uso generalizado del tratamiento antirretroviral de gran actividad (TARGA), Pneumocystis neumonía se diagnostica en pacientes con SIDA y se asocia con una elevada mortalidad. Aunque la prevalencia de Pneumocystis neumonía en los Estados Unidos ha disminuido, sigue siendo un problema en los pacientes con SIDA que tienen acceso subóptima a la prueba del VIH y la atención médica, los pacientes que reciben medicamentos inmunosupresores crónicos, o los que tienen el estado inmunitario alterado (79. 83). Pneumocystis es un organismo interesante que tiene características de protozoos y hongos y se ha clasificado como tanto en diferentes momentos en la historia (112). Además, las especies que es patógeno para los seres humanos (nombrados anteriormente P. carinii ) Ha sido recientemente rebautizado P. jirovecii. Aunque el modo de transmisión de Pneumocystis no se conoce, un mecanismo de suspensión en el aire se sospecha ya que la mayoría de los pacientes infectados con neumonía presentes. enfermedad extrapulmonar se ha documentado, pero es muy raro (112).

Sporothrix schenckii es la causa de las lesiones cutáneas linfocutánea y fijos tradicionalmente asociados con lesiones que se producen durante la manipulación de la tierra contaminada, plantas, y la madera. La transmisión en personas que manipulan animales enfermos, pero no recuerdo haber tenido una lesión en la piel también se ha documentado, sobre todo en los casos de niños y gatos (10). La mayoría de las lesiones se producen en las zonas expuestas, sobre todo en las manos, los brazos y la cara, con raros casos de enfermedad sistémica que afecta a los huesos, las articulaciones, las meninges, y otros órganos internos. Eritema nodoso y artralgias (sin infección de las articulaciones) se han descrito en pacientes con enfermedad cutánea y linfocutánea. A pesar de que S. schenckii se encuentra en todo el mundo, las infecciones son más comunes en climas tropicales y templadas. Los brotes de esta enfermedad en los seres humanos y animales en Sudáfrica y Brasil se han descrito (144).

De todos los Penicillium especies, P. marneffei es la causa más frecuente de la patología en los seres humanos (98). La enfermedad diseminada con este organismo se observa principalmente en pacientes inmunosuprimidos, particularmente aquellos con SIDA que han residido o visitado el sudeste de Asia (Tailandia, Vietnam, y la parte sur de China) (48). En algunas áreas es la tercera infección oportunista más común en pacientes con SIDA, la tuberculosis y después de la criptococosis. La enfermedad se presenta con fiebre que puede estar acompañada de escalofríos, pérdida de peso, anemia, lesiones cutáneas o subcutáneas, linfadenopatía, hepatoesplenomegalia, síntomas respiratorios y lesiones osteoarticulares.

(Ii) Características morfológicas.

En las secciones de tejidos teñidos con HE, Pneumocystis neumonía presenta como espumosas intra-alveolar exudados eosinofílica con infiltrado inflamatorio mínimo. En muestras de citología respiratorias con tinción de Papanicolaou, los organismos se funden en el fondo azul-verde mucosa. GMS tinción demuestra que el material espumoso en secciones de tejido o muestras citológicas corresponde a múltiples organismos que son esferas de paredes delgadas de 2 a 5 m que tienen un foco intraquística (punto capsular) (Fig. 3) (64). organismos colapsados ​​son usualmente se encuentran entremezclados con organismos intactos. reacciones inflamatorias atípicas a Pneumocystis han sido documentados, incluyendo la fibrosis pulmonar intersticial, granulomas, membranas hialinas, e infiltrados pulmonares intersticiales (64). En estos casos, es difícil sospechar que Pneumocystis está presente en la lesión.

S. schenckii en los tejidos parece como redonda, oval, o levaduras en forma de cigarro de 2 a 6 m o más grande en diámetro que pueden mostrar en ciernes base estrecha o en forma de tubo (34). S. schenckii levaduras no son fáciles de identificar con SE tiñe, y por lo tanto GMS y manchas de PAS se deben utilizar para destacar su contorno. En los casos de esporotricosis,, material eosinófilo en forma de estrella (fenómeno Splendore-Heppli) levaduras circundantes se pueden observar en 40-92% de los casos (24 de 138). Estas estructuras han sido llamados cuerpos asteroides, y Sporothrix se ha demostrado en los centros de estas estructuras mediante inmunohistoquímica (138). La infección está normalmente presente en un fondo de la inflamación granulomatosa con neutrófilos y microabscesos y diversos grados de fibrosis. La epidermis en lesiones cutáneas muestra hiperplasia seudoepiteliomatosa y microabscesos. Las levaduras son más abundantes en el microabscesos. En microabscesos epidérmicas, las levaduras se pueden mezclar con hifas. S. schenckii También se ha identificado mediante aspiración con aguja fina de lesiones (57).

En la tinción HE, adiaspores son la característica principal de adiaspiromicosis pulmonar. Adiaspores son gruesas esférulas, de doble pared que miden 20 a 400 metros o más y están vacías o que contienen glóbulos hialinos eosinófilos (162). Cuando se tiñen con GMS, la totalidad de las manchas de espesor de pared y muestra fenestraciones. Adiaspores generalmente provocan una reacción inflamatoria granulomatosa.

(Iii) Riesgos en el diagnóstico morfológico.

El diagnóstico diferencial de Pneumocystis incluye Histoplasma. En el ajuste normal clínico-patológica, el cuerpo de intraquística Pneumocystis es la clave para diferenciar este organismo a partir de Histoplasma. Sin embargo, Pneumocystis puede ser difícil de diferenciar de Histoplasma cuando se presentan granulomas en el interior o cuando hay una enfermedad extrapulmonar.

S. schenckii debe ser diferenciada de Candida (La presencia de seudohifas puede ser útil a menos que se C. glabrata ), Histoplasma (Búsqueda de grupos de organismos puede indicar la histoplasmosis), y Leishmania (Mediante la búsqueda de kinetoplasts). Además, los organismos Hamazaki-Wesenberg (estructuras elípticas pigmentadas visto en la sarcoidosis) se han confundido con S. schenckii (34). La presencia del fenómeno Splendore-Heppli es una característica distintiva importante de la esporotricosis.

Morfológicamente, coccidioidomicosis y rinosporidiosis muestran ya sea una spherule (Coccidioides ) O un esporangio (Rhinosporidium ) Que contiene estructuras endosporas como distintas; sin embargo, R. seeberi esporangios son más grandes y mucicarmín positivo, y el entorno clínico es diferente de la de la enfermedad (27).

El diagnóstico diferencial de adiaspiromicosis en los tejidos ha sido por lo general las infecciones por helmintos, ya que no hay otros hongos con estas características histológicas (42). Los helmintos mostrarán la musculatura y los órganos internos que no están presentes en adiaspiromicosis. Adiaspores pueden colapsar y formar diversas formas que se asemejan a otros hongos, helmintos o los granos de polen. Adiaspores se distinguen de Coccidioides esférulas en esférulas que contienen endosporas mientras adiaspores están vacíos.

(Iv) la prueba alternativa.

Pneumocystis no se puede recuperar en la cultura, y las pruebas de este modo alternativo se realiza generalmente mediante inmunofluorescencia directa. Aunque – d -glucano en el suero reacciona de forma cruzada con Candida y Aspergilo organismos, se ha demostrado que tiene una buena sensibilidad para la detección de Pneumocystis (83). Además de los cultivos para la detección de S. schenckii. una prueba cutánea (sporothricin) se ha utilizado en las zonas de endemicidad fuera de los Estados Unidos. P. marneffei pueden ser cultivadas a partir de sangre, lesiones cutáneas, o aspirados de los ganglios linfáticos. Las pruebas serológicas específicas para P. marneffei se ha estudiado en el sudeste asiático (48). Las pruebas serológicas que detectan los anticuerpos IgG contra P. brasiliensis están disponibles en los países donde es endémica y se utilizan para el diagnóstico y el seguimiento del tratamiento (123). Las pruebas cutáneas utilizando paracoccidioidina también se han utilizado para estudios epidemiológicos (75). no existe prueba alternativa para rinosporidiosis. Diagnóstico molecular con tejidos frescos se ha usado para varias de estas infecciones, utilizando cebadores específicos para estos hongos o cebadores panfungal (23. 45. 83).

Por lo general, las enfermedades en las hifas se ven en Tejido

Aspergilosis.

(I) epidemiológica y situaciones clínicas cuando aspergilosis deben considerarse en el diagnóstico diferencial.

Aspergilosis abarca tres entidades: la aspergilosis broncopulmonar alérgica (ABPA), aspergilosis / aspergiloma pulmonar crónica, y la aspergilosis invasiva o sistémica (13. 136). ABPA es una reacción de hipersensibilidad exagerada a una variedad de hongos, con mayor frecuencia A. fumigatus. en la fibrosis quística y pacientes asmáticos dependientes de esteroides. Estos pacientes pueden ser asintomáticos con infiltrados en las radiografías de tórax o tienen síntomas de bronquiectasias con copiosa producción de esputo que contiene manchas marrones o hemoptisis, además de sibilancias, fatiga, pérdida de peso y dolor en el pecho. Se han establecido criterios de diagnóstico para las diferentes etapas de la enfermedad (2. 59. 119). Sin embargo, todos tienen en común el reconocimiento de la inmunidad específica hacia Aspergilo antígenos, que no son pruebas estandarizadas (136). Una vez que el paciente ha alcanzado la fase fibrótica, la enfermedad no es reversible; por lo tanto, el diagnóstico en etapas anteriores es importante. Relacionados con ABPA es la rinosinusitis alérgica fúngica, una reacción de hipersensibilidad a los elementos fúngicos invasivos, en particular de la Aspergilo spp. (29. 145). Tanto la ABPA y mucina alérgica fúngica espectáculo rinosinusitis alérgica con hifas no invasiva, la atopia respiratoria, las pruebas positivas para el organismo fúngico etiológico de la piel, elevación de IgE totales, eosinofilia periférica, la asociación con complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) de clase II, y una respuesta favorable a esteroides . Además, ABPA muestra anticuerpos IgE e IgG-hongo específico elevadas.

(Ii) Características morfológicas que establecen la aspergilosis aparte.

Aspergilo spp. se describen generalmente como fina (de 3 a 12 m), septadas, de ángulo agudo (45) o hifas de ramificación dicotómica (Fig. 2). Vesículas con conidios pueden observarse cuando los hongos están presentes en lesiones cavitarias o los senos paranasales. Sin embargo, hay que recordar que múltiples Aspergilo especies pueden causar la aspergilosis, y esta descripción no siempre son representativas de las características de todas las especies o los cambios que pueden ocurrir después del tratamiento antifúngico. Por ejemplo, con A. niger infección, cristales de oxalato de calcio se pueden encontrar en muestras respiratorias. A. terreus es el único Aspergilo especies conocidas para producir redonda o en forma de pera aleurioconidia directamente a lo largo de las paredes laterales de hifas.

En la ABPA, el pulmón parece tener material mucoso espesa, tenaz en condiciones normales, fibrótico, o las vías respiratorias bronchioectatic. Microscópicamente, el moco contiene células inflamatorias (principalmente eosinófilos, linfocitos y macrófagos), espirales de Curshmann (epitelio descamado con eosinófilos), cristales de Charcot-Leyden e hifas escasa. La pared bronquial puede mostrar un espectro de cambios que incluyen la inflamación con eosinófilos, neutrófilos y macrófagos, granulomas, vasculitis, fibrosis intersticial, y microabscesos (136). La presencia de microabscesos con hifas podría representar una etapa temprana de la aspergilosis invasiva. El diagnóstico de la rinosinusitis alérgica fúngica es de exclusión y se basa en la demostración histopatológica en la mucosa obtenida durante la cirugía de hifas dispersa en el moco alérgica espesado (mucosidad que muestra concreciones laminadas de pyknotic y degranulated eosinófilos y cristales de Charcot-Leyden), sin invasión de hongos o necrosis (145). Algunos autores describen inflamación granulomatosa difusa, leve en la mucosa de los senos paranasales (41).

(Iii) Riesgos en el diagnóstico morfológico.

Un estudio de 122 muestras mostraron concordancia en el 83% de los casos con septos, agudo de ángulo de ramificación hifas en la histología y la presencia de Aspergilo spp. en la cultura, mientras Scedosporium spp. Fusarium spp. Pseudallescheria spp. Phialophora verrucosa. y Trichophyton spp. fueron recuperados en la cultura de los casos discordantes (86). Los cultivos de las mucosidades espesadas alérgicos de pacientes con rinosinusitis alérgica fúngica han producido múltiples especies de Aspergilo. spicifera bipolaris. y lunata Curvularia tanto como Staphylococcus aureus. Para estos pacientes hisopos nasales no son útiles para el diagnóstico (145). manchas Fontana-Masson pueden ser útiles para demostrar pigmentos en organismos dematiáceos (bipolaris y Curvularia ).

Los casos con infección dual con Aspergilo spp. y Candida o géneros mucoraceous se han descrito y plantean importantes dilemas de diagnóstico. Para ser capaz de identificar las infecciones duales, es fundamental contar con las pruebas de diagnóstico alternativo de tejidos como la inmunohistoquímica, en el lugar hibridación o PCR, que en este momento sólo están disponibles para su uso en investigación (70. 147). Además, en la aspergilosis pulmonar invasiva, los cultivos son positivos en sólo el 50% de las muestras de lavado broncoalveolar de fluido (148), y organismos recuperados de las muestras de fluido de BAL puede reflejar la colonización en lugar de el patógeno real. Por último, la detección de Aspergilo spp. en cultivos de sangre en casos de enfermedad invasiva es de aproximadamente 5%.

(Iv) la prueba alternativa.

Galactomanano y (13) – d glucano son componentes de la Aspergilo de la pared celular y se puede medir usando el disponible comercialmente EIA. Galactomanano se puede medir en el suero y el lavado broncoalveolar muestras de líquido utilizando el Platelia Aspergilo de prueba (Bio-Rad, Hercules, CA). Diferentes estudios de esta prueba han mostrado sensibilidades que van desde 40 a 100% y especificidades de entre 56 a 100%, dependiendo de la población de pacientes a prueba y los valores de corte utilizados (62. 97. 167). El problema más importante con las pruebas de galactomanano es que los resultados falsos positivos ocurren en aproximadamente el 50% de los pacientes que toman antibióticos (piperacilina, amoxicilina, o ticarcilina), el 100% de los pacientes tratados con sustancias que contienen productos de A. niger de fermentación (Plasmalyte), y varios porcentajes de pacientes con infecciones con otros hongos, incluyendo Penicillium. Paecilomyces. Alternaria. y Histoplasma. pruebas de galactomanano en serie de sueros de pacientes en situación de riesgo es una estrategia para definir si el paciente está colonizado, tiene una enfermedad invasiva, o está respondiendo apropiadamente al tratamiento.

El (13) – d glucano es un constituyente de la pared celular fúngica característica común a una amplia gama de patógenos fúngicos. El ensayo disponible comercialmente es el kit Fungitell (Cape Cod, Falmouth, MA) (114). De circulación (13) – d -glucano se detectó en los pacientes con infecciones fúngicas sistémicas, incluyendo la aspergilosis invasiva, candidemia, y Pneumocystis neumonía (3. 120). Las reacciones de falsos positivos se sabe que ocurren en algunos pacientes que están recibiendo piperacilina / tazobactam (101).

La mucormicosis (zigomicosis).

(I) epidemiológica y situaciones clínicas cuando mucormicosis deben considerarse en el diagnóstico diferencial.

defensa contra el anfitrión Mucorales géneros es principalmente a través de los macrófagos que inhiben la germinación de las esporas y los neutrófilos que utilizan el estallido oxidativo de matar a la proliferación de elementos de hifas; por lo tanto, los pacientes que tienen enfermedades que afectan a la función de estos dos tipos de células estarán en riesgo de infección (132). La cetoacidosis diabética causa la disfunción de los macrófagos y es el factor de riesgo más frecuente para la sinusitis y la infección rinocerebral. Como era de esperar, la quimioterapia y trasplante de células madre han surgido en las últimas 2 décadas como principales factores de riesgo para mucormycoses pulmonar invasiva. Además, estos hongos prosperan cuando el hierro está presente en el huésped, y aquellos pacientes que reciben agentes quelantes del hierro como la deferoxamina para reducir la sobrecarga de hierro también están en riesgo. Otros factores de riesgo incluyen el uso de drogas por inyección y la prematuridad. Si las defensas del huésped son pobres, las esporas germinan en el sitio de inoculación original y invaden los tejidos, incluyendo los vasos sanguíneos. Durante las fases iniciales de la infección existe edema, pero como las hifas invaden los vasos sanguíneos del tejido sufre necrosis y tiene un característico color negro. En contraste, los individuos inmunocompetentes infectados con Entomophthorales producir una respuesta inflamatoria intensa y se presentan con una masa en la piel, los senos paranasales, o en el tracto gastrointestinal.

Los tres principales manifestaciones clínicas más frecuentes de mucormicosis son rinocerebral, pulmonar e infecciones cutáneas. Cualquiera de estas manifestaciones primarias pueden dar lugar a la enfermedad diseminada. Los pacientes con mucormicosis rinocerebral tienen fiebre y descarga nasal. Las personas con esta enfermedad pulmonar tienen fiebre, nódulos pulmonares múltiples, y los derrames pleurales. La mortalidad debida a enfermedad diseminada es extremadamente alto, pero varía en función del factor de riesgo asociado y presentación clínica (137). La detección temprana en el sitio primario es imprescindible para establecer un tratamiento quirúrgico y antifúngica. Para el diagnóstico, debe obtenerse tejido tanto para el cultivo y la histopatología.

(Ii) Características morfológicas que establecen mucormicosis aparte.

Mucorales géneros se puede ver en las muestras de biopsia y la citología (aspiración con aguja y el lavado broncoalveolar). identificación de tejidos de estos moldes es una herramienta de diagnóstico muy importante, ya que distingue a la presencia del hongo como un patógeno en la muestra a partir de un contaminante cultura y es indispensable para definir si hay invasión de vasos sanguíneos. Mucorales géneros producen no pigmentado, de ancho (5 a 20 m), de paredes finas, hifas en forma de cinta con unos tabiques (pauciseptate) y ramificación en ángulo recto (132). Las hifas puede variar en anchura, aparecerá plegada o arrugada, y ser escasa o fragmentada. En las lesiones expuestas al aire, estructuras esféricas de pared gruesa se pueden formar en los extremos de las hifas (35). HE manchas de rutina pueden mostrar sólo la pared celular sin estructura interior. En citológico especímenes de las hifas se resaltará con Papanicolaou y calcoflúor manchas blancas. En ocasiones las hifas son muy degenerado, y muchas de las características no se puede apreciar en la muestra; Sin embargo, el patólogo debe mencionar que degenerada se observan hifas en la muestra, ya que identifica la fuente de donde se encuentra el hongo y se descarta la contaminación si hay dudas acerca de la contaminación en el cultivo. Las manchas que pueden ayudar a resaltar la pared fúngica incluyen GMS y manchas de PAS, a pesar de la fragmentación y la necrosis de los elementos fúngicos pueden hacer que estas manchas, en particular, GMS, para ser débilmente positivo o negativo (Fig. 2).

(Iii) Riesgos en el diagnóstico morfológico.
(Iv) la prueba alternativa.

Cultura de la muestra de tejido es indispensable para el diagnóstico organismo específico. Atención al uso de procesamiento cuidadoso, es importante ya que la molienda agresiva del tejido puede hacer que los elementos frágiles por hongos no viables (132). Mucorales géneros son los hongos de crecimiento rápido, pero por desgracia, el rendimiento de los cultivos es baja. A pesar de las pruebas serológicas se han intentado, no se recomiendan.

Enfermedades causadas por Fusarium. Scedosporium. y otra hialino septadas moldes.

(I) epidemiológica y situaciones clínicas cuando los moldes hialinas septadas deben considerarse en el diagnóstico diferencial.
(Ii) Características morfológicas que establecen mohos hialinos aparte.

Fusarium y Scedosporium puede mostrar un lugar destacado hifas obstruida usando varices y clamidoconidios intercalado (163). Fusarium spp. puede esporular en los tejidos, y por lo tanto puede haber una combinación de estructuras semejantes a las levaduras y las hifas en preparaciones histopatológicas (113). Scedosporium spp. rara vez esporular en los tejidos, pero puede hacerlo en pacientes con cavidades bola fúngica; en este caso los conidios ovoides están pigmentados, en correlación con el pigmento de melanina-como de las colonias (39).

(Iii) Riesgos en el diagnóstico morfológico.
(Iv) la prueba alternativa.

Los cultivos de sangre para Fusarium tener un alto rendimiento en comparación con los de Aspergilo porque de la esporulación accidental en el tejido. Sin embargo, la precaución debe ser ejercida cuando estos hongos se cultivan, ya que estos moldes son omnipresentes en el medio ambiente y con frecuencia causa la contaminación o colonización. El (13) – D-glucano prueba es positiva en estas infecciones y no puede ayudar a distinguirlos de otras infecciones fúngicas invasivas, incluyendo la candidiasis (113). Si la cultura no está disponible, las pruebas de galactomanano se debe realizar para tratar de diferenciar mohos hialinos de Aspergilo spp. Es importante hacer diagnósticos organismo específico de estos moldes porque algunos Fusarium especies y Scedosporium con frecuencia demostrar resistencia a azoles y equinocandinas, por lo que requiere la terapia de combinación (36. 113).

Enfermedades causadas por bipolaris /Curvularia y otros hongos dematiáceos.

(I) epidemiológica y situaciones clínicas cuando los hongos dematiáceos deben ser consideradas en el diagnóstico diferencial.

La presentación clínica de moldes dematiáceos

(Ii) Características morfológicas que establecen los hongos dematiáceo aparte.

El diagnóstico de estas entidades requiere un examen histopatológico de los tejidos y la cultura. Aunque las muestras de biopsia son los mejores para la histología y la cultura, raspaduras de las lesiones también pueden ser utilizados. Las muestras de biopsia deben obtenerse de las zonas con pigmento, ya que estos son sitios donde los hongos pueden ser encontrados. Todos los hongos dematiáceos muestran hifas pigmentada; sin embargo, el grado de pigmentación puede variar. Las células pigmentadas redondos característicos de chromoblastomycosis, que también se llaman lesiones moneda de cobre o cuerpos escleróticos, pueden mostrar tabiques internos. En los casos en que la pigmentación no es evidente con SE tiñe, Fontana-Masson tinción puede ser necesario para demostrar el pigmento melanina (54). Las hifas tienden a ser delgada (2 a 6 m de ancho) pero están hinchados irregular (también referido como toruloid o moniliforme) con septos prominente que muestran constricciones (Fig. 2) (33. 135). La frecuencia de ramificación dependerá del hongo. Las hifas puede mostrar hinchazones vesiculares terminales o intercaladas con paredes gruesas que se asemeja clamidoconidios. células semejantes a las levaduras pigmentadas también se pueden ver y pueden mostrar tabicación y en ciernes. Además, GMS y PAS manchas se pueden utilizar para poner de relieve la pared de hongos. Los elementos de hongos generalmente se observan en células gigantes multinucleadas o en el material necrótico extracelular. características morfológicas específicas se han descrito para los tres piel distinto y entidades de tejidos blandos.

El quiste phaeohyphomycotic presenta histopatológicamente como una sola lesión dérmica con cambios mínimos en la epidermis (33). La pared del quiste se compone de tejido colágeno denso y la inflamación granulomatosa con células gigantes abundantes. En el centro del quiste hay focos de necrosis geográfica y cuerpos extraños, presuntos astillas que llevan a la infección. elementos fúngicos (estructuras semejantes a las levaduras e hifas septadas) se pueden encontrar en toda la lesión. Cuando Phaeohyphomycosis queda diseminada en pacientes con cáncer, los elementos fúngicos se pueden observar en el 83% de las muestras (11). La reacción inflamatoria en la enfermedad diseminada es por lo general no específica (neutrófilos y células mononucleares), con sólo una cuarta parte de las muestras que muestra necrosis e incluso con menor frecuencia granulomas.

(Iii) Riesgos en el diagnóstico morfológico.
(Iv) la prueba alternativa.

enfermedad dermatofitos.

(I) epidemiológica y situaciones clínicas cuando dermatofitos se deben considerar en el diagnóstico diferencial.

micosis superficiales se cree que afecta a 20 a 25% de la población mundial (4). Los dermatofitos son la causa predominante, con géneros infectar a los seres humanos de tres anamórfico principal (asexuales o imperfectas): Epidermophyton. Trichophyton. y Microsporum (165). Los dermatofitos se encuentran en todo el mundo, por lo general relacionados con las materias de queratina que sirve como fuente de infecciones humanas y animales. Algunas especies han restringido el más ubicaciones geográficas; por ejemplo, soudanense Trichophyton se encuentra principalmente en África central, mientras Trichophyton rubrum. Trichophyton mentagrophytes. Microsporum canis. y Epidermophyton floccosum están distribuidos en todo el mundo. La migración de las poblaciones ha dado lugar a cambios en la distribución de los diferentes dermatofitos. Además, ha habido una disminución de estas infecciones con mejoras en las condiciones de vida y el uso de agentes antifúngicos.

Además de los dermatofitos, otros hongos pueden causar infecciones de piel y cabello superficiales (8). Las presentaciones clínico-patológicas y los hongos responsables se presentan en la Tabla 4. Los dos grupos más importantes son Malassezia spp. y Candida spp. Malassezia Las infecciones causan la tiña versicolor y están particularmente asociados con la aplicación de aceites y lociones, uso de corticosteroides, la exposición a la luz solar, hidrosis, y la dermatitis seborreica, posiblemente, (100). En los pacientes con SIDA, superficiales Candida Las infecciones son comunes e incluyen queilitis (fisuras dolorosas en las comisuras labiales) y una variedad de lesiones mucocutáneas, incluyendo placas atróficas, lesiones pseudomembranosa, o leucoplasia (125).

La presentación clínica de los dermatofitos

(Ii) Características morfológicas que establecen dermatomicosis aparte.

Para detectar dermatofitos en la capa de piel de la queratina, es necesario el uso de GMS o mancha PAS ya que estos son los hongos hialinos que son difíciles de observar en la capa de queratina utilizando HE (66). Hifas y aleurioconidia pueden ser visualizados, siendo especialmente importantes en los folículos pilosos. La reacción del huésped al hongo es muy variable. En la capa de queratina puede haber leve hiperqueratosis con paraqueratosis focal. En las lesiones agudas de la epidermis muestra espongiosis y microabscesos neutrófilos. Por último, la dermis muestra diversos grados de linfocitos perivasculares y células plasmáticas, y en algunos casos no pueden ser prominentes edema papilar (71). Cuando un dermatofito causa inflamación severa de los folículos pilosos y los ejes, se llama kerion si el infiltrado es principalmente neutrofílica o granuloma de Majocchi si crónica con prominente inflamación mononuclear. En ambos casos las células gigantes pueden estar presentes y con frecuencia contienen fragmentos de hifas. En raras ocasiones dermatofitos pueden invadir la epidermis y la dermis, produciendo lesiones nodulares que se asemejan a micetoma.

(Iii) Riesgos en el diagnóstico morfológico.
(Iv) la prueba alternativa.

Enfermedades causadas por otros moldes (Coelomycetes).

(I) epidemiológica y situaciones clínicas cuando Coelomycetes deben considerarse en el diagnóstico diferencial.
(Ii) Características morfológicas que establecen Coelomycetes aparte.

Es importante realizar estudios histopatológicos en estos casos, ya que Coelomycetes son ubicuos y se pueden producir contaminación del cultivo. Los elementos fúngicos son bastante pleomórfico y pueden ser moniliforme, levaduras en forma de perlas a hifas ramificado o no ramificado corto. Algunos tejidos pueden mostrar elementos semejantes a las levaduras, en función del plano en el que se cortó el tejido. Los elementos de hongos muestran pigmento.

(Iii) la prueba alternativa.

Estos hongos pueden ser difíciles de identificar debido a que no producen estructuras reproductivas en el tejido aunque muestran moderada a un rápido crecimiento. Por lo tanto, la amplificación por PCR panfungal con la secuenciación del producto ha sido utilizado para identificar cepas cultivadas (51).

Técnicas que se utilizan para la identificación en MATERIAL HISTOPATOLÓGICAS

La tinción histoquímica

Métodos.

El examen histopatológico de los tejidos para detectar hongos es y seguirá siendo una herramienta importante para definir el significado de diagnóstico de la cultura aislados positivos, incluyendo la invasión fúngica de los tejidos y los vasos, así como la reacción del huésped al hongo. Histopatología también puede proporcionar un rápido diagnóstico presuntivo del hongo a la espera de los resultados del cultivo de hongos, o puede proporcionar el único material disponible cuando se produce ningún crecimiento de la cultura o culturas no se les ordenó. El examen histopatológico de muestras de biopsia, resección especímenes quirúrgicos y material de autopsia siempre debe comenzar con tinción HE del tejido. GMS y la tinción de PAS deben llevarse a cabo si se sospecha un hongo después de la revisión de las secciones de tejido debido a la presencia de una respuesta inflamatoria del tejido o cuando existe una alta sospecha clínica, aunque la coloración de HE es poco revelador. Además, la mucina (mucicarmín) o melanina (Fontana-Masson) manchas pueden ser de gran utilidad para la identificación de Cryptococcus (Mucina y la melanina) y hongos dematiáceos que pueden no producir abundante pigmento (melanina). Tabla 5 presenta los diferentes manchas y métodos alternativos para los hongos que pueden utilizarse en secciones de tejido. Es importante recordar que algunas infecciones micóticas, particularmente durante las fases agudas, dan lugar a la inflamación neutrofílica o supurativa, por lo que las circunstancias epidemiológicas e historia clínica también pueden provocar la necesidad de utilizar estas tinciones especiales. En pacientes inmunodeprimidos puede no haber inflamación, pero la necrosis pueden estar presentes debido a la invasión fúngica de los vasos sanguíneos y la trombosis asociada. invasión fúngica de los vasos sanguíneos debilita la pared y puede resultar en hemorragia. La comunicación entre clínicos y patólogos es muy valiosa para definir los casos en los que GMS, PAS, Fontana-Masson, o las manchas mucicarmín pueden ser útiles para poner de relieve los hongos. Como el uso de procedimientos menos invasivos ha vuelto más frecuente en la medicina, las muestras citológicas se han convertido en muestras comunes. líquido de lavado broncoalveolar es un espécimen frecuente utilizada para diagnosticar infecciones pulmonares (81). Otras muestras citológicas incluyen esputo, líquido cefalorraquídeo, y aspirados con aguja fina de lesiones. La mayoría de los hongos se pueden visualizar con las tinciones de rutina utilizados para las preparaciones citológicas, incluyendo Papanicolaou y Giemsa; sin embargo, la pared de los hongos no se pone de relieve, ya sea con mancha. Con el fin de manchar la pared de hongos, GMS y las manchas de PAS se pueden utilizar en muestras citológicas. Calcofluor blanco, una mancha alternativa que pone de relieve los elementos de hongos, se puede utilizar con muestras citológicas frescas si un microscopio de fluorescencia está disponible; Como alternativa, las preparaciones húmedas hidróxido de potasio se pueden estudiar usando de campo brillante o microscopía de contraste de fase. El lavado broncoalveolar y muestras de líquido cefalorraquídeo también se pueden utilizar para la detección de antígenos fúngicos.

Las manchas y métodos alternativos que pueden ser utilizados con secciones de tejido

Con el fin de evitar errores de clasificación, los patólogos deben describir los elementos fúngicos observados en la muestra y se abstengan de tratar de ofrecer un diagnóstico específico. Patólogos necesitan recordar que hay muy pocos casos en que las características morfológicas específicas. Algunos grupos han sugerido el uso de plantillas o sinóptica de informes para el diagnóstico de las infecciones por hongos. En la Fig. 1., 2, 2. y 3 y3 hemos sugerido plantillas para la presentación de informes sobre las muestras histopatológicas de acuerdo con las características morfológicas encontradas. Es importante reconocer que el diagnóstico es fundamentalmente descriptiva del hongo y se debe incluir o no hay invasión de los tejidos y los vasos, la cantidad de elementos fúngicos observado, y la reacción del huésped a la infección (inflamación, necrosis o hemorragia ). La sección de comentarios del informe debe indicar claramente los hongos más frecuentemente asociados con que la morfología, así como otros organismos posibles (hongos y parásitos) que deben ser consideradas en el diagnóstico diferencial. Todos los informes de patología también deben incluir una declaración en la sección de comentarios con respecto a la importancia de la correlación de las características clínico-epidemiológico y resultados de los cultivos y otras pruebas de laboratorio.

Ventajas.

La histopatología es indispensable en algunos casos para definir si un organismo recuperado en la cultura representa la contaminación, colonización o infección verdadera. Tejido y la invasión vascular y necrosis son características histopatológicas importantes que pueden ayudar a hacer la distinción.

En algunos casos, los cultivos de hongos pueden tardar semanas en completarse, y por lo tanto un diagnóstico histopatológico preliminar de una infección por hongos pueden estar listos antes de que la cultura y pueden proporcionar información suficiente para que los médicos inician el tratamiento. Por ejemplo, Scedosporium. Sporothrix. blastomices. y Coccidioides puede tomar hasta 3 a 4 días para crecer y Histoplasma y Paracoccidioides puede tomar más de 2 semanas; Por lo tanto, el diagnóstico histopatológico podría estar disponible antes de los resultados del cultivo (140).

Desventajas.

En las secciones anteriores hemos hablado de las trampas para cada hongo en la comparación de su morfología con los de otros hongos o parásitos. Además de estas dificultades, los patólogos deben diferenciar las posibles estructuras fúngicas de las estructuras de tejidos humanos normales manchados. Particularmente cuando se usan las manchas de la SGM, estructuras de tejidos normales que se pueden confundir con levaduras incluyen gránulos de melanina y neurosecretoras, mientras que las hifas requiere la diferenciación de las fibras de colágeno, las membranas basales, y otras estructuras filamentosas-tinción de plata. La Figura 4 muestra gránulos neurosecretoras, que en comparación con cualquiera de las levaduras tienden a ser irregular, más pequeño, y situado dentro de las células neurosecretoras, mientras que las membranas basales y fibras de colágeno tienden a mostrar menor intensidad de la tinción y menos nitidez de hifas. Para ayudar en el reconocimiento de estas diferentes estructuras de los tejidos y los hongos, es importante colocalize las estructuras GMS-manchadas en secciones de tejido (por lo general de un nivel consecutivo) teñidas con HE o tinción PAS. La combinación de GMS contrastados con HE, en lugar de verde claro, es una manera de lograr la colocalización en una diapositiva. Además, los patólogos deben evaluar la presencia o ausencia de estructuras internas que se pueden observar en hongos (núcleos y citoplasma) que se tiñen con HE, pero no con GMS.

trampas de diagnóstico. Al utilizar las manchas de la SGM, estructuras de tejidos normales pueden aparecer como levaduras o hifas. (A) gránulos neurosecretoras (flecha). fibras (B) de colágeno, con uno mostrando incluso un pseudoseptum (flecha). (C) En las muestras con pocos organismos, .

Otra ocurrencia de desventaja que puede ocurrir durante la interpretación de colorantes especiales es cuando la muestra presenta algunos hifas transversalmente cortada, que luego aparecen como levaduras que pueden incluso parecen estar en ciernes (Fig. 4). En estos casos, es importante profundizar en el bloque para ver si hay más elementos fúngicos cortadas longitudinalmente están presentes en la muestra.

Histopatología por lo general no puede proporcionar los géneros y especies de hongos, que son muy importantes para el tratamiento. Por ejemplo, un caso con hifas hialinas septadas incluye en el diferencial Aspergilo spp. Fusarium. Scedosporium. y otros. Por lo tanto, el tratamiento debe ser con voriconazol, que es eficaz para todos estos hongos; Sin embargo, el tratamiento con anfotericina B o la adición debe hacerse sólo para A. fumigatus y F. solani. El itraconazol o equinocandinas podrían ser utilizados para A. fumigatus pero no sería eficaz para F. solani o Scedosporium (140). La detección de levaduras con seudohifas sugiere Candida spp. con un diagnóstico diferencial que incluye moldes tabicado hialinos; Por lo tanto, fluconazol podría ser utilizado para cubrir la mayor parte Candida spp. pero que carecen de actividad contra C. krusei. C. glabrata. o los otros mohos hialinos septados.

Las infecciones con más de un hongo se han reportado en quemaduras y pacientes inmunosuprimidos (70. 143). A pesar de que la histopatología podría esperarse que sea un método adecuado para identificar estas infecciones dobles, la diversidad morfológica puede ser sutil y no apreciado. Por lo tanto, otras pruebas se deben utilizar para determinar si más de un organismo está presente.

muestras secuenciales teñidas con GMS (ampliación, 120) que muestra infecciones de moho en un paciente neutropénico con leucemia linfocítica crónica. (A y B) hialina septadas hifas en el pulmón. El cultivo fue positivo para Aspergillus fumigatus. .

La inmunohistoquímica

Métodos.

La inmunohistoquímica se refiere al uso de anticuerpos para detectar objetivos (antígenos de hongos) en secciones de tejido de manera que la morfología del objetivo, así como los tejidos circundantes puede ser visto. Para estos ensayos es necesario cortar una sección muy delgada de tejido (similar a la utilizada para la histopatología) y colocarla en un portaobjetos de vidrio. El tejido puede ser fresca o congelada de parafina embebido. El tejido que ha sido incorporado por lo general se fija con formalina, que puede causar la distorsión de antígenos, en particular si la fijación ha sido largo. En general, los patólogos prefieren usar tejidos fijados con formalina, incluidos en parafina (FFPE) ya que este es el procedimiento histopatológico de rutina que hace que el material infeccioso y fácilmente almacenado a temperatura ambiente. Para realizar el ensayo, parafina debe ser eliminado del tejido, que normalmente se realiza con reactivos que deshidratan el tejido. El tejido debe ser rehidratada y, o bien se trata con enzimas o sometidas a otras técnicas de recuperación de antígeno que hará que antígenos fúngicos disponibles para los anticuerpos, y después se aplican los anticuerpos antifúngicos. En algunos métodos, el anticuerpo primario ha sido enzima o marcado con fluorescencia, mientras que otros procedimientos de llamada para un anticuerpo marcado secundario cuyo objetivo es por lo general la porción Fc del anticuerpo primario. Una vez que los anticuerpos marcados han sido incubadas durante una cantidad apropiada de tiempo, las secciones de tejido se lavan para eliminar los anticuerpos no unidos. Si se utilizan etiquetas fluorescentes, la sección de tejido se puede visualizar con un microscopio de fluorescencia. Aunque los anticuerpos fluorescentes se han utilizado para los hongos en los centros especializados, este método de marcaje no permite la visualización de los tejidos circundantes y las preparaciones no son permanentes. En el caso de etiquetas de enzimas tales como la peroxidasa, el color necesita ser desarrollado con los sustratos y el tejido counterstained apropiados, lo que permite la visualización del hongo y los tejidos circundantes.

La elección del anticuerpo primario es muy importante para definir los mejores objetivos. Los anticuerpos utilizados en otros métodos tales como inmunodifusión o fijación del complemento se han probado en ensayos inmunohistoquímicos, ya que hay pocos anticuerpos disponibles comercialmente validados específicamente para inmunohistoquímica en tejidos FFPE (128). reactivos inmunohistoquímicos que detectan Aspergilo spp. y mucormycetes en el tejido están disponibles comercialmente (ABD Serotec). Es muy importante validar estos ensayos, a partir de una amplia evaluación de las reactividades cruzadas de los anticuerpos primarios con cultivos y tejidos que han sido tratados de una manera similar a la de las muestras desconocidas que se probarán (73). La amplia presencia de antígenos comunes en los hongos se ha traducido en muy pocos anticuerpos primarios específicos clínicamente útiles. Por ejemplo, varios estudios utilizando una variedad de anticuerpos monoclonales y policlonalesAspergilo anticuerpos han demostrado una amplia gama de reactividades cruzadas con otros mohos hialinos, septados mucormycetes, y algunas levaduras (122. 128. 146).

Los estudios de ensayos inmunohistoquímicos para los hongos se reportaron uniformemente distribuida tinción del organismo fúngico (128), aunque hemos observado que las hifas no viable puede no mostrar la tinción cuando se utilizan estos ensayos, en particular en los tejidos con la mucormicosis. Además, la tinción de antígeno se ha observado fuera de los organismos fúngicos, similar a lo que ha sido bien documentado en ensayos inmunohistoquímicos para las infecciones bacterianas (149). Para ser capaz de interpretar adecuadamente ensayos inmunohistoquímicos, es imperativo utilizar los controles de anticuerpo apropiado (un anticuerpo irrelevante del mismo tipo [monoclonales frente policlonal]) en un portaobjetos de tejido del paciente secuencial de modo que define la cantidad de no específica tinción presente para cada caso (46).

Ventajas.

En teoría, la inmunohistoquímica para los hongos tiene muchas ventajas, incluyendo la combinación de la morfología (el elemento de hongos en sí, su localización en el tejido, y la reacción inflamatoria) con detección específica del organismo usando muestras que se procesan de forma rutinaria en los laboratorios de patología para que resulten no infeccioso. múltiples plataformas de automatización están disponibles comercialmente para los ensayos de inmunohistoquímica, reduciendo el coste y tiempo de respuesta. Por último, los anticuerpos marcados con enzimas resultan en un registro permanente de la reacción. A medida que nuevos anticuerpos no reacción cruzada son desarrollados y probados utilizando esta técnica, inmunohistoquímica puede proporcionar una alternativa de bajo costo y rápida a los ensayos más costosos que no se combinan con la morfología de la detección del hongo específico. Además, los ensayos de inmunohistoquímica de doble tinción permitirán la detección simultánea de más de un hongo en secciones de tejido (70. 73. 143).

Desventajas.

En este momento, muchos de los anticuerpos disponibles en reacción cruzada con múltiples hongos y no se pueden utilizar para la detección de organismos específicos. Evaluación, verificación y validación de los anticuerpos y ensayos inmunohistoquímicos se deben realizar en el laboratorio antes de resultados se pueden utilizar para fines de cuidado de pacientes. Dado que los anticuerpos son reactivos específicos de analito (ASR), verificación y validación en los Estados Unidos deben seguir las regulaciones federales (25).

En el lugar Hibridación

Métodos.

En el lugar la hibridación se refiere a la utilización de sondas para detectar la presencia de ácidos nucleicos fúngicos específicos preservando al mismo tiempo la morfología del tejido de manera que la morfología del hongo y la reacción del tejido para el organismo puede ser visualizado. Para estos ensayos, una sección de tejido fino se coloca en un portaobjetos y la hibridación se lleva a cabo directamente en la diapositiva. De manera similar a la inmunohistoquímica, el tejido puede ser congelado o FFPE. Si el tejido se incluyó en parafina preparación de las secciones de tejido antes de la hibridación incluye desparafinación y rehidratación. Después de la rehidratación, las proteínas unidas a ácidos nucleicos deben ser digeridos usando enzimas (pepsina o proteinasa K). Los tejidos se hibridaron previamente a continuación con una solución que contiene formamida, DNA de esperma de salmón, y el ARN de levadura para disminuir la cantidad de unión no específica de la sonda con el ADN y el ARN en los tejidos. El ADN de tejido es entonces desnaturalizado y se hibridaron con la sonda de elección. Después de la hibridación, la sonda no unida o exceso se lava utilizando diferentes concentraciones de citrato salino estándar. La sonda se detecta a continuación, en una variedad de maneras, dependiendo de cómo se marcó la sonda. Por último, los tejidos se contratiñeron.

Ventajas.

En el lugar hibridación ofrece el más alto grado de especificidad en comparación con tinciones histoquímicas e inmunohistoquímica (las otras técnicas basadas en la morfología). Al igual que con histoquímica e inmunohistoquímica, en el lugar ensayos de hibridación realizados con tejidos FFPE tienen la ventaja de usar muestras no infecciosas que se procesan de forma rutinaria en los laboratorios de patología. plataformas automatizadas para en el lugar la hibridación ya existen; Sin embargo, los costes son más altos y el tiempo de respuesta es por lo general más largo que para los ensayos de inmunohistoquímica. En este momento, la diferenciación de Fusarium de otros moldes septadas hialinos es muy importante clínicamente y ha sido demostrado usando en el lugar hibridación (67. 103). Aunque sondas para todos los hongos aún no están disponibles comercialmente, las sondas que se utilizan en otros entornos, tales como fluorescente en el lugar hibridación para Cryptococcus y Candida spp. en cultivos de sangre y LCR, lo que potencialmente podría ser validada para en el lugar plataformas de hibridación para el tejido FFPE (91. 95).

Desventajas.

Métodos basados ​​en la PCR

Métodos.

La PCR se ha utilizado para detectar el ADN de hongos en los tejidos FFPE. FFPE de tejidos no es la muestra de elección. tejidos frescos no incrustados han demostrado una sensibilidad para la detección por PCR de los hongos del 97%, mientras que la sensibilidad de material incluido en parafina es sólo el 68% (84). El ADN fúngico se extrae a partir de muestras FFPE se puede degradar y, en baja concentración, y que a menudo contiene sustancias que inhiben la digestión de proteínas o la amplificación de ADN. Sin embargo, cuando se detectan elementos fúngicos en secciones de tejido FFPE y cultivo de hongos no está disponible, la PCR puede en algunos casos determinar el organismo que está causando la infección. Dependiendo del método de extracción de ADN, la calidad del ácido nucleico, determinada como el porcentaje de muestras en las que se recupera un control de limpieza de genes humanos, puede variar de 60 a 90%, y por consiguiente la eficiencia de la PCR es de entre 57 y 93% (106) . Cada muestra de tejido tiene que ser probado con un ADN control humano para determinar la calidad del ácido nucleico extraído.

No hay comparación lado a lado de la cultura con PCR a partir de tejidos FFPE. Un estudio prospectivo comparando la cultura de PCR a partir de tejido fresco congelado mostró que los cultivos fueron positivos en el 63% de los casos, mientras que la PCR fue positiva en el 96% (134). Sin embargo, los resultados de estudios retrospectivos han demostrado que una vez que los tejidos son fijados con formalina, PCR positividad puede ser tan bajo como 60% (106). Los estudios que comparan los métodos de detección de hongos, incluyendo histopatología, PCR, en el lugar la hibridación y la inmunohistoquímica realizada con tejidos FFPE, no están disponibles. Histopatología todavía parece ser la mejor herramienta de detección para definir la presencia de elementos fúngicos y verificar que el hongo está causando la enfermedad en el tejido (19); sin embargo, para definir el hongo específico o los hongos presentes, detección de ácidos nucleicos (PCR o en el lugar hibridación) es probablemente más específica que la inmunohistoquímica en este momento.

Ventajas.

Desventajas.

Los ácidos nucleicos obtenidos a partir de material FFPE son frecuentemente dañadas (reticulado) o pueden contener inhibidores de la PCR y así puede ser incapaz de generar un producto de PCR adecuado, pueden no mostrar homología con el cebador utilizado, o puede generar un producto que no puede ser secuenciado ( 84). La selección del método de extracción de ADN es crucial para obtener el mejor rendimiento de este material (106). Además, cuando los elementos de hongos son escasos en los tejidos, la cantidad de ADN obtenido puede ser insuficiente para llevar a cabo un ensayo de PCR.

La elección del cebador de PCR es importante. Existe una variación suficiente en la región ITS1 de diferenciar ciertas especies, incluyendo C. neoformans. algunos Candida spp. y Fusarium spp .; por lo tanto, se debe considerar el análisis de otras regiones (37. 84). Además, los resultados falsos positivos con específica H. capsulatum cebadores y dificultades en la identificación Coccidioides en se ha informado de tejidos fijados con formalina (15. 17). Un estudio de la Clínica Mayo de 147 muestras FFPE mostró que la histología encontraron más casos coccidioidomicosis de PCR (19). Por último, se estima que 10 a 20% de las secuencias en GenBank se identificó erróneamente (106).

La microdisección por láser

Métodos.

Un aspecto importante de la microdisección es que la preparación de tejido antes de que el tejido se coloca en las diapositivas deben adaptarse a la prueba secundaria. La preparación incluye la fijación (o su ausencia) y tinción. La exposición de los tejidos a las cantidades más pequeñas de productos químicos asegura los menos alteraciones de la muestra para las pruebas posteriores. pruebas secundarios posibles incluyen PCR de ácidos nucleicos, la microscopía electrónica de orgánulos celulares, y espectrometría de masas o electroforesis bidimensional en gel de poliacrilamida de las proteínas (115. 159). Si se prepara correctamente, las células microdissected incluso pueden ser cultivadas.

Hasta ahora microdisección por láser se ha utilizado principalmente para el diagnóstico y la investigación de enfermedades neoplásicas, pero varios investigadores han reportado el uso de esta técnica para el estudio de enfermedades infecciosas (74. 169). El uso de esta herramienta en la ecología de las infecciones por hongos duales nos permitiría comprender mejor la fisiopatología de estos casos. microdisección láser se ha utilizado para la identificación de un único hifa de A. fumigatus a partir de tejidos de aves fresco congelado (115). Aunque las secuencias de ADN se obtuvieron de 60% de los animales, un producto de PCR no se obtuvo del resto, lo que sugiere que la cantidad de ADN dependerá del número de hifas y el número de núcleos intactos seleccionados.

Ventajas.

La mayor ventaja de microdisección por láser es que los elementos a ensayar puede ser seleccionado específicamente. Por lo tanto, las infecciones duales y el medio ambiente local en los que esto ocurre pueden ser estudiados en detalle. Otra ventaja es que el material obtenido no será contaminado con los tejidos que no son micóticas.

Desventajas.

instrumentos de microdisección de captura por láser son caros, y muchos laboratorios no pueden tener uno o ser capaz de pagarlos. Desde el punto de vista técnico, hay la posibilidad de que ciertos componentes no pueden conservarse ya que el calor en el láser puede destruir los elementos seleccionados para prueba secundaria (107). La contaminación puede ocurrir si un sistema de microdisección requiere el uso de dispositivos particulares para seleccionar las células, en comparación con la colocación de las células en el tubo donde se llevará a cabo la segunda prueba. Las desventajas que se producen para la prueba secundaria serán los mismos que los observados en estas pruebas, con el inconveniente añadido de obtener potencialmente muy pequeñas cantidades de material. Otra desventaja que se ha informado es que los núcleos intactos fúngicas deben ser obtenidos para la extracción de ADN. En particular con los organismos que son mucormycete pauciseptate, el material de las hifas se puede recoger con éxito, pero no puede contener núcleos.

INTERPRETACIÓN EN DIFERENTES SITUACIONES

Elementos de hongos en el tejido pero todas las muestras en formalina

La situación en la que los elementos fúngicos están en tejido, pero la totalidad de la muestra es en formalina es relativamente frecuente por varias razones: (i) el cáncer es el diagnóstico más frecuente de las lesiones que se resecan o una biopsia, y el procedimiento de rutina para los tejidos obtenidos en la operación y habitaciones endoscopia es colocarlos en formalina de modo que se conserva la morfología de diagnóstico de cáncer; (Ii) no todas las lesiones son estudiadas usando secciones congeladas (iii) cuando se obtiene una sección congelada y muestra los elementos fúngicos, el patólogo no puede pensar que es necesario recordar que el cirujano que una porción estéril de la lesión debe ser enviada al laboratorio de microbiología para los cultivos; y (iv) la comunicación entre los especialistas en enfermedades infecciosas y cirujanos no siempre se establece antes de que se obtiene el tejido. Formación y una mejor comunicación entre los cirujanos, radiólogos intervencionistas, patólogos y especialistas en enfermedades infecciosas debe llevarse a cabo de manera que esta situación reduce al mínimo.

Los cultivos positivos pero el tejido sin hongos Elementos

La situación en la que hay cultivos positivos pero el tejido sin elementos de hongos puede producirse en cuatro casos: (i) el hongo presente en los cultivos es un colonizador en el paciente; (Ii) el hongo presente en el cultivo es un contaminante en el laboratorio; (Iii) el tejido se muestrea a partir de dos áreas diferentes, con una muestra enviada a la microbiología y la otra a la patología; o (iv) La muestra patológicos no se ha estudiado de forma exhaustiva con tinciones especiales adecuados. En esta situación, es importante conocer la patología que se observó en la muestra y la ubicación y el número de colonias que se encuentran en las placas. Cuando sólo se observan una o dos colonias en el área de la inoculación de la placa y hay patología mínimo en las secciones de tejido, es razonable pensar que el hongo presente en el cultivo puede ser un colonizador. Cuando sólo una o dos colonias se observan lejos de la zona de inoculación primaria de la placa y hay patología mínimo en las secciones de tejido, es razonable pensar que no había contaminación del cultivo de hongos. También es posible que el cirujano muestrea dos áreas diferentes del tejido y que la que contiene los hongos viable fue enviado a la microbiología, mientras que la segunda muestra, no contiene los elementos fúngicos, se envió a la patología. Por lo tanto, habrá cultivos positivos, pero el tejido no contendrá elementos fúngicos. Por último, la muestra se ha enviado a la patología pueden no haber mostrado la patología generalmente asociado con las infecciones por hongos y por lo tanto el patólogo no hayan solicitado manchas especiales, o los elementos de hongos puede ser tan escasa que podrían haber pasado por alto. En cualquiera de estos casos es indispensable para correlacionar los hallazgos de laboratorio (patología y Microbiología) con la presentación clínica del paciente y determinar si es necesario realizar una prueba alternativa. Por ejemplo, si una Fusarium colonia se encontró en el medio de la placa y había necrosis o hemorragia en la muestra de tejido de un paciente gravemente neutropénicos, obtener cultivos de sangre puede ser una prueba alternativa razonable ya que las infecciones invasivas con Fusarium se pueden encontrar en la sangre. Sin embargo, en el mismo escenario, si el organismo cultivado había sido una Aspergilo sp. o un miembro de la Mucorales géneros, la obtención de cultivos de sangre no sería útil.

En los casos en las secciones de tejido muestran patología (inflamación, necrosis, o hemorragia), es importante que el patólogo, clínico y de laboratorio de microbiología se comunican para definir la necesidad de examinar más profundamente en el bloque de tejido y verificar que los portaobjetos se tiñeron con GMS y manchas Pas. Cualquier hongo en baja abundancia puede ser difícil de identificar, y las secciones más profundas teñidas con PAS GMS y manchas puede ser necesario. Además, las hifas en pacientes infectados con Mucorales géneros pueden ser bastante distorsionada y negativa o débilmente positivo GMS; por lo tanto, el uso de manchas de PAS es indispensable. Si la patología presente en los tejidos es consistente con la enfermedad fúngica alérgica, la búsqueda de los elementos de hongos puede ser difícil. las pruebas alternativas apropiadas puede ser necesario, dependiendo de los resultados de la cultura, la patología encontrada, y la presentación clínica.

Elementos de hongos en el tejido pero los cultivos sin crecimiento

La situación en la que hay elementos de hongos en el tejido pero los cultivos sin crecimiento puede ocurrir en tres casos: (i) cuando el tejido en el laboratorio de microbiología se muele demasiado agresivamente y se destruyen las células de hongos; (Ii) cuando el hongo en el tejido no es viable; o (iii) cuando el tejido se muestrea a partir de dos áreas diferentes, con una muestra enviada a la microbiología y la otra a la patología. Mucorales géneros son particularmente propensos a ser destruido con el procesamiento agresivo de los tejidos. De este modo, se ha recomendado que la muestra no ser molido o homogeneizada pero en lugar de que la siembra directa de piezas de tejido más grandes en los medios de comunicación por hongos se debe realizar de forma rutinaria. Si el espécimen de patología muestra hifas con unos tabiques compatibles con Mucorales géneros, el crecimiento positivo debe producirse dentro de los 3 días, y el laboratorio de microbiología a continuación, puede dar al médico un diagnóstico presuntivo. Si el crecimiento no se ha producido en el tiempo esperado, es posible que no habrá crecimiento. Sin embargo, debido Histoplasma y Paracoccidioides creciendo lentamente in vitro. cultivos de hongos se incuban por lo general durante al menos 4 semanas en la mayoría de los laboratorios.

hongos viables en el tejido son frecuentes en crónica, infecciones amuralladas-off con levaduras endémicas, como en la criptococosis, histoplasmosis, coccidioidomicosis o. Esto también podría suceder si el paciente ha recibido medicamentos antifúngicos. También es posible que el cirujano muestrea dos áreas diferentes del tejido y que la que contiene los hongos fue enviado a la patología mientras que la segunda muestra, no contiene los elementos fúngicos o que contiene hongos no viables, fue enviado a la microbiología. Por lo tanto, habrá cultivos negativos pero el tejido contendrá elementos fúngicos. Independientemente de la razón de la falta de crecimiento, elementos fúngicos en la patología del tejido haciendo que deben ser tratados como se describe en la primera situación, es decir, donde hay elementos de hongos en el tejido pero todo de la muestra es en formalina.

Cultura discrepancia entre los resultados y hallazgos histopatológicos

Una discrepancia entre los resultados del cultivo y los hallazgos histopatológicos se puede deber a que (i) la morfología característica de que el hongo ha sido alterado debido al uso de medicamentos antimicóticos o las respuestas del huésped o (ii) hay una doble infección y sólo un hongo crece en la cultura . Con más casos en estudio mediante PCR, se ha hecho evidente que las infecciones duales son más frecuentes de lo que se creía. Aunque la selección de los casos a partir del estudio de los CDC pueden estar sesgados (debido a los casos difíciles que se envían para el diagnóstico de una instalación de referencia), infecciones duales pueden ocurrir hasta en el 20% de los casos (106). En estas situaciones, la descripción patológico puede referirse sólo a la hongo más abundante presente en la muestra, y la segunda hongo puede no haber sido mencionado. Si un segundo hongo no se menciona, pero crece en la cultura, los resultados pueden parecer discrepante. Razones para la recuperación de sólo un hongo en casos de infecciones duales incluyen el procesamiento demasiado agresivo donde se destruyen las células fúngicas más grandes pero más pequeños sobreviven, el crecimiento de un hongo inhibir el crecimiento de la segunda, o condiciones de cultivo inapropiados tales que sólo un hongo se pueden recuperar.

biografías

Mary E. Brandt. un nativo de Filadelfia, Pensilvania, recibió su B. S. en Chestnut Hill College, una EM en microbiología clínica de la Universidad Thomas Jefferson, y un Ph.D. en microbiología e inmunología en la Universidad de Temple. Se unió a los Centros para el Control y Prevención de Enfermedades en 1991 y actualmente es el Jefe de la Subdivisión de Enfermedades micótico. Dirige el Laboratorio de Referencia Hongo CDC y el curso de formación de identificación molde CDC. Ella es un editor de la sección de la micología Manual de Microbiología Clínica así como un editor asociado o miembro del consejo editorial de varias revistas de microbiología clínica. Sus intereses de investigación incluyen la detección, identificación, y la epidemiología molecular de hongos de importancia médica.

Referencias

Se proporcionan artículos de Microbiología Clínica Los comentarios aquí por cortesía de Sociedad Americana de Microbiología (ASM)

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